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恩杜姆病毒RT-PCR试剂盒
Ndumu Virus
产品及特点 ：
它具有下列特点：
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据恩杜姆病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL（橘黄盖） |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL（红盖） |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
试剂四 | 恩杜姆病毒RT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
试剂五 | 恩杜姆病毒RT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的
DNA 片段作为阳性对照。
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂： 样品 RNA。
使用方法 一、样品 RNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 恩杜姆病毒 PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
成份 | N+2 个 样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性对照 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
恩杜姆病毒RT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
恩杜姆病毒RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 30 min |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
58℃ | 30 sec | |
72℃ | 20 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测：
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！